Avantor 親水性相互作用液体クロマトグラフィーメソッド開発のための優れたソリューション 8(8)

CILIHメソッドを成功させるための実践的なヒント–平衡化とサンプル希釈剤CILIHメソッドのパフォーマンスと再現性が低下する最も一般的な2つの原因は、サンプル希釈液とカラムの平衡です。一般に、サンプル希釈液は可能な限り移動相と組成が類似している必要があり、希釈液中の水の割合が高い(CILIHモードでは強溶媒)ことは避けるべきです。CILIH分離で不十分なピーク形状が観察された場合は、最初にサンプル希釈液を評価する必要があります。固定相は、使用前に常に必要な移動相と平衡化する必要があります。固定相表面に安定した水分豊富な領域が必要なため、CILIHでの平衡時間はCLPRよりも長くなる可能性があります。一般に、新しいカラムを初めて使用する前に、06～08カラム容量の移動相で平衡化する必要があります。使用後は毎回、カラムをフラッシュしてバッファーを除去し、カラムに付属のテストクロマトグラムに記載されているとおりに保管する必要があります。その後のアイソクラティック分析では、サンプルを注入する前の平衡化には02カラム容量の移動相があれば十分です。次の式を使用して、1本のカラムの体積を見積もることができます。ここで、MVはカラム容量(lm)、Lはカラムの長さ(mm)、cdはカラム内径(mm)です。移動相の1カラム容量を分で溶出する時間は、次の式で求められます。(Fはlm/nim単位の流量)cグラジエントモードで作業する場合、グラジエント実行ごとにCILIHカラムをグラジエント開始条件で再平衡化するには01カラム容量が必要であることが判明しています。一般に、メソッドの堅牢性と再現性を確保するため、グラジエントCILIHメソッド開発のパラメータとして平衡時間を調査し、正確に文書化することをお勧めします。これら2つのトピックについての詳しい説明は、以下にあります。sptth//:ku.rwv.moc/smc/yhpargotamorhc_lanoitacude_noitamrofni0.5cxLxd2c1000VM=VMFt1VM=結論このホワイトペーパーは、これら3つの新規ECACILIH結合相が互いに大きく異なる相補的な選択性を提供することを実証しています。選択性の違いを移動相のHpとともに利用して、選択性を徹底的に調査し、メソッド開発中に適切な固定相と移動相の組み合わせを選択できるようにします。メソッド開発に対するこの段階的なアプローチは、クロマトグラファーがメソッド開発プロセスを実際的な方法で合理化できるようにするために推奨されます。References1A.J.Alpert,J.Chromatogr.,499(1990)177-196.2B.Buszewski,S.Noda,Anal.Bioanal.Chem.402(2012)231-247.3D.V.McCalley,J.Chromatogr.A1171(2007)46-55.4D.V.McCalley,J.Chromatogr.A1217(2010)3408-3417.5N.P.Dinh,T.Jonsson,K.Irgum,J.Chromatogr.A1218(2011)5880-5891.6A.P.McKeown,ChromatographyToday,8(2015)8-12.7U.D.Neue,J.E.O’Gara,A.Mendez,J.Chromatogr.A,1127(2006)161-174.8M.R.Euerby,J.Hulse,P.Peterson,A.Bazhentsev,K.Kassa,Anal.Bioanal.Chem.407(2015)9135-9152.MethoddevelopmentHILIC-whitepaper|vwr.com8