Avantor 親水性相互作用液体クロマトグラフィーメソッド開発のための優れたソリューション 6(6)

次に、異なる移動相Hpで3つのCILIH相で定組成または勾配条件を使用してサンプルをスクリーニングし、分離に適したカラムとHpの組み合わせを特定します(ステップ2)。次に、有機物%、温度、緩衝液強度などのパラメーターを最適化して(ステップ3)、最終的なCILIH分離を行うことができます。このような戦略を採用することで、メソッド開発プロセス中に十分な情報に基づいた論理的な決定を下し、適切なカラムと移動相の組み合わせを使用して堅牢なメソッドを開発することができます。ParameterCommentsColumnACEHILIC-A,ACEHILIC-BandACEHILIC-N,150x4,6mmGradientmobilephaseA:10mMammoniumformateinMeCN/H2O(96:6v/v)B:10mMammoniumformateinMeCN/H2O(50:50v/v)AmmoniumformateisatpH3,0;4,7or6,0GradientscreenTime(mins.)%B001510020100210410Isocraticmobilephase10mMammoniumformateinMeCN/H2O(90:10v/v)AmmoniumformateisatpH3,0;4,7or6,0Flowrate1,5ml/minTemperature25°CDetectionDependentonsample特に図9は、3つの異なる移動相HpでCILIH-Bでクロマトグラフィー処理された同じ分析物のセットを示しています。移動相のHpを変更することで、酸性分析物の保持を制御でき、分離の選択性が大幅に変わります。移動相のHpが選択性を最適化するための強力かつ実用的な手段となることが明確に実証されています。合理化されたCILIHメソッド開発戦略このホワイトペーパーに示されているデータから、CILIHでのメソッド開発への強力なアプローチは、CILIH固定相の種類と移動相のHpの両方を調べて適切な固定相と移動相の組み合わせを特定することです。図01は、これらのパラメータに基づいた論理的で段階的なメソッド開発戦略の概要を示しています。最初（ステップ1）、できるだけ多くの分析物情報aK (p、golP、golDなど) を収集することをお勧めします。図9.異なる移動相HpにおけるCILIH-B相上の酸性(赤)、塩基性(青)、中性(緑)分析物の混合物の比較Columnformat:5µm,150x4,6mm,mobilephase:Isocratic,10mMammoniumformateinMeCN/H2O(90:10v/v),flowrate:1,5ml/min,temperature:25°C,injectionvolume:5µl,detection:UV,254nm.Sample:1.4-aminobenzoicacid,2.nicotinamide,3.4-hydroxybenzoicacid,4.acebutolol,5.adenine,6.tyramine,7.atenolol,8.2’-deoxyganosine,9.mandelicacid.図1.CILIHスクリーニング実験の推奨条件pH3.0pH4.7pH4.7MethoddevelopmentHILIC-whitepaper|vwr.com6