Avantor 親水性相互作用液体クロマトグラフィーメソッド開発のための優れたソリューション 4(4)

直交選択性を最大化してメソッド開発を改善CILIHファミリのカラムは、さまざまな移動相組成およびHpにわたって互いに異なる選択性を提供する3つのCILIH相を提供するように設計されています。同一条件下で一連の分析対象物をクロマトグラフィー処理し、2つの相でのそれぞれの分析対象物の保持時間の違いを調べることにより、選択性の観点から2つのCL固定相が互いにどのように異なるかを定量的に評価することができます。2つの相上の分析対象について得られた保持時間をプロットすると(図5の例を参照)、決定係数(R2)で示される散乱によって選択性の違いを特定できます。散乱度が高い(R2値が小さく、1,0から遠い)ことは、2つの相が非常に異なる選択性を示していることを示します。その後、式1に従って選択性記述子Sを取得することが可能になります。[7]3つのCILIHカラムによる選択性の違いを調べるために、合計84個の化合物を同一のクロマトグラフィー条件下でスクリーニングしました。S=100×√(1−R2)EQUATION1CILIHの典型的な動作Hp範囲を調査するために、3つの移動相Hp値(3,0、4,7、および6,0)で実験を繰り返しました。図6は、各Hpでの3つのCILIH相を比較した選択性の三角形を示しています。得られた大きなS値は、3つの相が各Hp値で互いに実質的に異なる選択性を提供することを示しています。これらの選択性記述子の値は、3つの相が特定のHpで一連の分析対象物に対して異なる保持順序と溶出順序を提供する可能性があることを示しており、これはメソッド開発スクリーニングに理想的です。0に近いS値は2つの位相が同一の選択性を提供することを示し、値001は完全な直交性を示します。図5.CILIH-A相とCILIH-N相での84種類の分析物の保持時間の比較。実験条件の詳細については、参考文献6および8を参照してください。図6.S3つの異なる移動相Hpにおける3つのCILIH相の選択性を比較した選択性の三角形MethoddevelopmentHILIC-whitepaper|vwr.com4HILIC相間の直交選択性の例を図7に示します。一連の酸性、塩基性、中性分析対象物を、pH4.7の3相でクロマトグラフィー処理しました。中性分析物は3つの相で同様の溶出順序を示しますが、2'-エオキシグアノシンはHILIC-B相およびHILIC-N相ではるかに大きな保持を示します。負に帯電した酸性分析物は、HILIC-Aでは低い保持率を示し、HILIC-Nでは中間の保持率を示し、HILIC-Bでは保持されます。これは、このアプリケーションの各フェーズによってもたらされる静電相互作用の程度が異なるためであると考えられます。正に帯電した塩基性分析物(ピーク4、7、および8)は逆の傾向を示し、HILIC-Bでは保持時間が短くなり、HILIC-Aでは保持力がはるかに強くなります。