Avantor 親水性相互作用液体クロマトグラフィーメソッド開発のための優れたソリューション 2(2)

CILIHは構造的に複雑であり、分析物、固定相、溶離液の間の相互作用の複数のモードの組み合わせが関与します。CILIHでは、図2に示すように、固定相表面に水分が豊富な層が存在します。この層を形成するには、移動相に少なくとも約3%の水が必要です。分析物の保持は、多くの場合、水分が豊富な層への分析物の分配と、水素結合および静電相互作用の組み合わせによるものです。[2-5]CILIHを検討すべき場合CILIHは、CLPRによる保持が難しい親水性分析物に適用できます。検体のgolP値とgolD値は、CILIHによる保持に対する検体の適合性を示すことができます。一般に、分析物がCLPRでカフェインより前に溶出する場合(golP~ゼロ)、CILIHによる分析に適している可能性がありますが、後に溶出する分析物はCLPRにより適している可能性があります。図3は、ECA®C81カラムでPR勾配を使用して分離された3つの分析物のクロマトグラムを示しています。シトシンは親水性が非常に高いことより、C81カラム上ではほとんど保持されないため、CILIHの候補として適しています。疎水性分析物のナフタレンはよく保持され、CLPRに最適です。カフェインはCLPRモードで保持されますが、CILIHモードでも保持される可能性があります。CLPRとCILIHの間のこの重複領域は、どちらのモードにも利点があるため、しばしば議論の対象になります。通常、選択はアプリケーション主導で行われます。CILIHのメリットCILIH技術は、極性分析物の保持に加えて、他の有用な利点も提供します。図4は、CILIHがどのようにCLPRに対して直交選択性を提供するかを示しています。この例では、分析物の混合物の溶出順序がCLPRと比較してCILIHモードで完全に逆転します。選択性はクロマトグラフィーにおける分析対象物の分離の鍵であるため、CILIHを使用して極性から極性の分析対象物の選択性を最大化することは役立ち、サンプル内のすべての種が観察される可能性を高めるための強力なツールです。CLPRとは異なり、CILIHでは、極性化合物を保持するためにイオン対試薬(他の理由で困難な場合があります)などの移動相添加剤を使用する必要がありません。溶離液中のアセトニトリルの体積分率が高いと、背圧が低くなり、拡散率が高くなるため有利です。実際には、これによりアナリストは次のことが可能になります。StationaryPhaseParticleWaterenrichedlayerElectrostaticRepulsionElectrostaticAttractionNeutralAnalyteChargedAnalyteChargedAnalytePolarNeutralAnalyteH-bondingPartitioning図2.CILIHにおける保持メカニズムの概略図図3.逆相とCILIH動作範囲の実際的な図Column:ACE®Excel2C18,100x3,0mmMobilephase:A:10mMammoniumformatepH3,0inH20B:10mMammoniumformatepH3,0inACN/H20(90:10v/v)Gradient:5to100%Bin10minutesFlowrate:0,4ml/minTemperature:30ºCDetection:UV,254nmMethoddevelopmentHILIC-whitepaper|vwr.com2より小さく、より効率的な粒子とより高い流量を使用し、より迅速な分離につながります。さらに、CILIHモードでは有機修飾剤の含有量が高いため、CL-SMアプリケーションのエアロゾル液滴脱溶媒和がより効果的に行われ、その結果、イオン化が改善され、信号応答が強化されます。