Avantor 医薬品原薬中のニトロソアミン不純物の測定　DMFとNDMAの共溶出に関連する問題への対処 9(9)

Chromatographywhitepaper|avantorsciences.com9その後の捜査では、SMRHと比較してトリプル四重極SMの質量分解能が低いことを考慮すると、IPAまたは医薬品に残留FMDが存在する場合、31Cおよび51NFMD同位体イオンからのトランジションが現在のメソッドにおけるAMDN定量化に潜在的に干渉する可能性があることが予想されました。これは、さまざまな濃度のFMDを添加した一連の1.0gn/LmAMDNサンプルを分析することによって評価されました(表8)。選択されたFMD濃度は、HCIQ3C(R8)で指定されている定義された残留溶媒制限内にあります。5)2Quantifierm/z75.0→43.0Qualifierm/z75.0→58.0SpikelevelNDMA(ng/mL)DMF(ng/mL)DMF(ppm*)CalculatedNDMAConc.(ng/mL)%AccuracyCalculatedNDMAConc.(ng/mL)%Accuracy01,0001,03102,91,07106,711,083,31,251,03103,31,04103,621,0833,312,51,37137,01,15114,631,01666,7251,64163,61,22121,641,03333,3502,20220,01,42141,951,06666,71003,07306,81,60159,7FMDはAMDNと共溶出することが判明し、この低濃度では表8に示すように定量精度に悪影響を及ぼし、AMDN濃度が誤って高く計算されることになりました。また、m/z57.0→85.0AMDN修飾子トランジションは、m/z57.0→34.0量子子トランジションよりも影響が少ないことにも注目しました。このデータから、タンデム質量分析計などの質量分解能の低い検出器を使用する場合、この問題を回避するには、FMDとAMDNをクロマトグラフィーで分離することが非常に有利であることが明らかです。さらに、AMDNの過剰定量の危険性があるサンプルを特定するために、同じ分析実行でFMDの存在について医薬品と物質を監視できる機能も有益です。表8:AMDN定量化に対するFMDからの潜在的な干渉を評価するために使用したスパイク実験の概要CHROMATOGRAPHYSOLUTIONSNDMA(分子量=74.08)と共溶出するDMF(分子量=73.09)が干渉を引き起こし、その結果NDMA含有量が過大評価され、報告値の研究室間の不一致の原因となる可能性があると仮説が立てられました。具体的には、分析アプローチの特異性がNDMAと区別するのに十分でない場合、DMFの同位体イオン(13Cまたは15N)による干渉により、理論的にはNMDAの定量が不正確になる可能性があります。15NDMF同位体イオンは、NDMA単同位体イオンとわずか0.0016amu(21ppm)だけ異なるため、誤ってNDMAとして識別される可能性があります。13CDMF同位体イオンは104ppm異なるため、干渉する可能性は低くなります。±15および±30ppmの質量許容値設定を使用した実験では、より広い許容値設定を適用した場合、DMFを含むサンプルでより高いNDMA濃度が記録されました。不適切な質量精度と許容誤差設定が適用されると、LC-HRMS分析で15NDMF同位体イオンがNDMAとして誤識別され、結果としてNDMAの過剰定量が発生する可能性があると結論付けられました。干渉の可能性は、DMFとNDMAが共溶出する場合にのみ発生します。これは、複数のニトロソアミンがが必要な場合に特に影響を与える可能性があります。7、8、9)　NDMAとDMFはどちらも、図4で使用したソリッドコアC18上で非常に低い保持率を示し、保持係数(k)はわずか0.3でした。両方の分析物の親水性とグラジエントで使用される有機溶媒の開始パーセントが低いため、より優れた保持力を得ることが困難になります。カラム固定相を変えることは、分析物の選択性と保持を調整できる強力なツールであるため、より良好な保持と分離が可能かどうかを評価するために、さまざまな固定相をスクリーニングしました。26)完全多孔質カラムは通常、固定相材料の多孔性が増加し、したがって表面積が大きくなるため、対応する固体コアのカラムよりも保持力が高くなります。ソリッドコアカラムをAvantor®ACE®Excel2C18完全多孔質カラムに交換することにより疎水性が増加し、NDMA保持率が向上することがわかりました(k=1.1)。このカラムは、NDMAからDMFをさらに分離できることもわかり(図6A)、今後の可能性のあるルートが得られます。検出され、より低いレベルの定量限界