Avantor 液体クロマトグラフィーにおけるメソッド変換の成功 9(9)

9CHROMATOGRAPHYSOLUTIONSメソッド変換を成功させるためのヒントとコツメソッド変換で可能な限り最良の結果を得るには、受信側CLシステムのいくつかの側面を考慮する必要があります。その中で最も重要なのは、システムの分散と検出機能です。カラム外のバンドの広がりは、分析物のクロマトグラフィーバンドに影響を与える分散効果によって生じ、メソッドのパフォーマンスが低下します。CLシステムのカラム外容積は、分散の主な要因です。カラム外容積に大きく影響する要因としては、流路内のシステムチューブ、インジェクターチューブ、検出器フローセルの容積、および品質の悪いチューブ接続(分析カラムなど)が挙げられます。(11,21)051x4.6mmなどの従来のより大きなフォーマットのカラムの場合、システムの余分なカラム容積の影響は、大きなカラム容積に比べて無視できます。ただし、カラムデッドボリュームがはるかに小さい、より小さいフォーマットのカラム(内径2.1mmおよび3.0mmなど)の場合、カラム外容積がクロマトグラフィーバンドに与える影響は大きくなります。したがって、従来のメソッドをより小さなフォーマットのカラムに変換する場合は、新しい分離に対するカラム外分散の潜在的な影響を考慮し、デッドボリュームが低く、ナローボアのカラムが適切に最適化された装置でのみ使用されるようにすることが重要です。一般に、特にアイソクラティック分離の場合、CLPHシステムでの使用には4.6mmDIのカラムが推奨され、最適化されたCLPHおよびCLPHUシステムでの使用には3.0mmDIのカラムが推奨され、2.1mmDIは低分散CLPHUシステムでの使用に限定される必要があります。内径1.0mm以下のカラムは、適切なキャピラリーまたは「ナノ」CLでのみ使用してください。さらに、アイソクラティック分析では、保持係数が低い分析物は、十分に保持されている分析物よりもカラム外バンドの広がりの影響をかなり受けやすいことを考慮する価値があります。カラム外のバンドの広がりを減らすには、可能な場合はCLシステムのチューブDI、フローセルの経路長と体積などを減らすことで改善できます。(11)カラムIDを大きくする(例:ID2.1mmカラムではなくID3.0mmカラムに変換する)ことも、望ましい分析時間の短縮と移動相消費量の大幅な削減を達成しながら、影響を軽減するのに役立ちます。さらに、検出器の設定が変換されたメソッドに対して適切に最適化されていることを確認することも重要です。一般に、クロマトグラフィーのピーク全体で少なくとも02個のデータポイントを収集する必要があります。メソッドをより小さな粒子が充填されたより小さなフォーマットのカラムに変換すると、ピーク幅が減少します。したがって、データのサンプリングレートを高める必要があります。カラム外バンドの広がりの影響と同様に、アイソクラティック法で早期に溶出する分析物は、検出器のサンプリング速度が遅いことによる悪影響を受けやすくなります。これは、高速アイソクラティックCLPHUメソッドの効率と分離能に対する検出器のサンプリングレートの影響を示す図6に示されています。早期に溶出するサンプル成分(つまり、保持係数が低い)の場合、狭いピークを完全に表してメソッドのパフォーマンスを向上させるには、少なくとも04～08zHのデータ捕捉速度が必要です。後で溶出する分析物の効率は、それほど影響を受けません。図6:rotnavA®ECA®eroCartlU2.5CrepuS81(57x3.0mm)を使用した、さまざまなデータ収集速度での抗ヒスタミン薬の定組成分離®®Methodconditions:Isocratic30mMKH2PO4pH2.7inMeOH:H2O40:60v/v,flowrate:0.85mL/min,injectionvolume:0.9µL,columntemperature:30°C,detector:UV,214nm.Sample(inorderofelution):1.maleicacid,2.norephedrine,3.doxylamine,4.salicylamide,5.guaifenesin,6.guaiacol,7.chlorpheniramine,8.triprolidine.ただし、データサンプリングレートが速いとベースラインノイズが増加する可能性があり、これが微量サンプル成分の測定に問題となる可能性があるため、アプリケーションに応じてバランスを慎重に考慮する必要があります。