Avantor 液体クロマトグラフィーにおけるメソッド変換の成功 5(5)

5CHROMATOGRAPHYSOLUTIONSSelectnewcolumnformatScaleinjectionvolumeScaleflowrateCalculateruntimeCheckbackpressureOriginalmethodTranslatedmethodDifferenceEfficiencyoflastpeak12,38712,357RunTime35mins.4mins-88.6%Solventconsumption35.0mL5.0mL-85.7%図2:CLPHからCLPHUへのアイソクラティックメソッドの変換　Methodconditions:IsocraticMeCN:H2O30:70v/v,columntemperature:40°C,detector:UV,214nm.Sample:1.1,2,3-trimethoxybenzene,2.1,2,4-trimethoxybenzene,3.1,4-dimethoxybenzene,4.methoxybenzene,5.1,3-dimethoxybenzene,6.1,3,5-trimethoxybenzene,7.Toluene.グラジエント法の変換グラジエントプロファイルでは新しいカラムのデッドボリュームと流量に合わせてスケーリングする必要があるため、グラジエントメソッドの変換は多少複雑になります。勾配プロファイルを分解し、各セグメントを個別に変換する必要があります。勾配セグメントは式7を使用して変換できますが、アイソクラティックホールドは式8を使用して変換できます。7tG1xF1xVM2F2VM1tG2=8tISO1xF1xVM2F2XVM1tISO2=アイソクラティック変換と同様に、注入量は式1を使用して調整でき、流量は式3および4を使用して選択できます。図3は、これらの変換原理を使用して元の052mmカラムからグラジエント法を変換する方法を示しています。5μmの粒子を充填したカラムから、3μmの粒子を充填した051mmカラムに充填します。どちらのカラムもL/Pd比が05,000であるため、分離のピーク容量と分離能が維持され、全体として46.7%の実行時間の短縮が達成されます。流量の増加と粒子サイズの減少にもかかわらず、この翻訳されたメソッドは、標準の004rabCLPH機器と完全に互換性があります。理想的には、変換されたグラジエント法は、元の分離を最も正確に再現するために、システムドウェルボリューム(DV)および/またはカラムデッドボリューム(MV)の変化を補正する必要があります。ただし、図3に示すような多くの勾配変換では、この補正を適用しなくても許容可能な分離が得られます。変換勾配法が実験的に評価され、望ましい分離が得られることが判明した場合は、この補正を省略してもよい場合があります。