Avantor 液体クロマトグラフィーにおけるメソッド変換の成功 4(4)

4CHROMATOGRAPHYSOLUTIONSカアイソクラティック法の変換アイソクラティック法は変換が比較的簡単で、必要なのは注入量と流量の単純な容積測定のみです。注入量(iV)は、式1に従って、元の注入量と新しいカラムMV2とMV1の内部容積から単純に計算されます。1Vi2=Vi1×VM2VM1カラム容量は、適切なデッドタイムマーカーを注入することによって実験的に決定するか、式2を使用して推定することができます。2VM=π()2Lε2dc変換されたメソッドに別のDIカラムが使用されている場合は、それに応じて流量をスケーリングする必要があります。粒子サイズが変化しない場合、カラムを流れる移動相の線速度を一定に維持するために流量が調整されます。(式3)移動中に粒子サイズが変化した場合は、別の式を使用して新しい流量を推定できます。(式4)(5、6、7)この方程式は、元の方法と変換された方法の間のプレートの高さの違いを考慮して、ほぼ同様の分離効率を提供しようとしています。34F1xd2c2d2c1F2=F1xd2c2xdp1d2c1xdp2F2=実際には、変換されたメソッドは、式4を使用した場合に予想よりも低いピーク効率値をもたらす可能性があります。したがって、元のメソッドで提供されるものと同様のパフォーマンスを達成するために、変換された流量をさらに調整または削減することは許容されます。このアプローチは米国薬局方内で推奨されており、実践として受け入れられています。(1、3)最後に、新しいメソッドの実行時間は式5を使用して計算でき、背圧は式6を使用して推定できます。5t1F1VM2F2VM1t2=6P1xF2xL2xd2c1xd2p1F1xL1xd2c2xd2p2P2=図2は、これらの重要な方程式を適用して、アイソクラティックメソッドをCLPHからCLPHUに変換する方法を示しています。この例では、一定のL/Pd比を維持することで元の分離の効率と分離能が維持され、流量を1.7μmの粒子サイズにスケーリングすることで実行時間が8 8.6% 短縮されます。ラムDI(したがってカラム容積)をスケールダウンする際に考慮すべき重要な点は、測定されたピーク効率に対する機器のばらつきとバンドの広がりによるマイナスの影響です。カラムの寸法が小さくなると、機器の分散はカラムの性能に比例して大きな悪影響を及ぼします。これについては、このホワイトペーパーで後ほど詳しく説明します。メソッドをより小さいDIカラムに変換するときに考慮すべき追加の要素には、流量供給の精度、より低い注入量での注入再現性、検出器のサンプリングレート、および新しいメソッドの検出モードが含まれます。rotnavA®ECA®カラムの場合、カラムの空隙率(ε)は完全多孔質粒子の場合は0.36、eroCartlUソリッドコア粒子の場合は0.55と見なされます。一方、CdとLはそれぞれカラムのDIと長さに対応します。