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糖鎖解析糖鎖の構成要素は一次糖基または単糖であり、その範囲は広範囲に存在します。主な識別要因は、環構造5(ペントース)または6(ヘキソース)に含まれる炭素数です。単糖の異なる形態間のその後の区別は、ヒドロキシル基の相対的な位置に依存します。糖鎖は、グリコシド結合を介して結合した1つ以上の単糖からなる化合物です。(図1)図2は、糖鎖の考えられる構造のいくつかの例を示しています。得られる糖鎖構造の複雑さは、完全な化学構造を引き出すことが現実的ではないことを意味するため、代わりに、さまざまな糖鎖の標準化された図的表現がdlefnroKによって8791年に提案されました。3)背景バイオ医薬品市場の成長により、最終製品の品質を保証するプロセスだけでなく、製造プロセスの理解も大幅に進歩しました。規制の側面から見ると、これは、バイオ医薬品の純度の決定を目的として特別に設計されたADF規制の策定で見ることができます。1)これにより、最終製品の日常分析に使用される共通のワークフローが開発されました。ワークフローにはさまざまな分離技術が含まれており、それぞれが元のタンパク質に対する共有結合修飾または酵素修飾のジャンルの特定の分析を対象としています。このワークフロー内で実行される最も重要な分析の1つは、bAmの形状、有効性、毒性に実質的な影響を与える可能性がある糖鎖構造の分析です。2)モノクローナル抗体は、独自の白血球をクローニングすることによって生成される抗体です。bAmは一価の親和性を持ち、抗原の一部にのみ結合します。これは、病状のマーカーとして特定の抗原の単離および検出を支援するためにまたはシグナル経路を破壊するための治療法として、または病状を引き起こしている特定の細胞のアポトーシスを引き起こす標的分子の機能をブロックするためのいずれかに使用できます。このレベルの特異性と、より高い純度まで製造および精製できる能力により、これらの化合物の開発と製造が大幅に増加しました。製造プロセスの一部として、タンパク質(bAm)が翻訳後修飾を受け、タンパク質の一次構造に糖鎖が追加される可能性があります。図1:グリコシド結合生成の反応スキーム図2:N-グリカン構造の例
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表1:一連の糖鎖の図的表現と、そのうちの1つの分子形態の例。このリストは完全なものではありませんが、包括的なリストは参考資料4にあります。表1は、より一般的な糖鎖グループの概要とその図を示しています。この表記法は、GFNSまたは糖鎖のシンボル命名法と呼ばれることがよくあります。この表記法を使用すると、得られる糖鎖構造が、存在する単糖の様々な形態を表す一連の形状と色で表示されます。糖鎖が直鎖状か分岐状か、どの時点で分岐が起こるのかなど、糖鎖の全体的な構造も詳しく説明されています。糖タンパク質では、糖鎖はタンパク質上のさまざまな異なる基を介して結合できますが、通常、糖鎖はN(窒素)結合またはO(酸素)結合を介してタンパク質構造に結合します。N結合型糖鎖は、小胞体の側鎖を含むアスパラギンまたはアルギニンの窒素に結合します。この修飾は特定のアミノ酸配列で発生します。nsA-XAA-reSまたはnsA-XAA-rhT、XAAはプロリンを除く任意のアミノ酸です。糖鎖は、N-セチルガラクトサミン、ガラクトース、ノイラミン酸、N-アセチルグルコサミン、フコース、マンノース、および他の単糖で構成されます。図3:モノクローナル抗体のグリコシル化領域を示す概略図bAmでは、図3に示すように、糖鎖結合は結晶化可能領域(cF)で発生します。グリコシル化は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害(CCDA)や補体依存性細胞傷害(CDC)の媒介など、bAmの安定性と機能に大きな影響を与えるため、バイオ医薬品のグリコシル化プロファイルの決定は不可欠です。5)N-グリコシル化はbAmの構造を安定化します。、折り畳まれにくくなり6)、凝集しにくくなります。7)O-結合型糖鎖は、セリン、スレオニン、チロシン、ヒドロキシリシン、またはヒドロキシプロリン側鎖のヒドロキシル酸素に結合します。N-糖鎖とは異なり、糖鎖が結合する特定のアミノ酸配列は決定されていません。bAmN-糖鎖のアフコシル化により、白血球エフェクター細胞の表面に存在する受容体に対するbAmの結合親和性が増加し、CCDAが強化される可能性があります。8,9)いくつかの研究は、糖鎖上の末端シアル酸残基が抗炎症反応を媒介し、生体内でのCCDAを減少させ、0) 1アレルギー反応を抑制することを示唆しています。1)1ガラクトシル化はCCDAに影響を与えません。ただし、N-糖鎖上のガラクトース残基の存在は、CDC21、3)1または抗炎症活性の増加につながる可能性があります。4)1高マンノースN-糖鎖は、血液からのbAmのクリアランスの加速と相関し、薬物の循環半減期を短縮することが示されています。51-7)1Fc=結晶化可能なフラグメント、Fab=抗原結合フラグメント、Hc=重鎖、Lc=軽鎖
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