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min0.511.52mAU0501001502001234567801.Maleicacid,2.Norephedrine,3.Doxylamine,4.Salicylamide,5.Guaifenesin,6.Guaiacol,7.Chlorpheniramine,8.TriprolidineAmin0123mAU010020030040050060070012345678910B1.Aspirin,2.Phenacetin,3.Sulindac,4.Tolmetin,5.Naproxen,6.Nimesulide,7.Flurbiprofen,8.Diclofenac,9.Phenylbutazone,10.Meclofenamicacidavantorsciences.com|Chromatographywhitepaper10したがって、より短いカラム長を使用しても高い分離効率が得られ、分析時間の短縮につながります。さらに、やや平坦なファンディームター曲線は、より高い移動相流量を利用できることを意味し、分析時間とサンプルスループットがさらに向上します。図7は、小型フォーマットのカラムに充填されたrotnavA®ECA®eroCartlUCrepuS81粒子を使用して、アイソクラティックとグラジエント逆相分析の両方で高速分離を行うことを示しています。どちらの場合も、対象分析物は3分以内に完全に分離されます。これら2つのアプリケーションは高い線速度(4.6mmDIカラムで2lm/nimに相当)を利用しますが、これらの分離はそれぞれ624rabと302rabという比較的穏やかな背圧で達成されるため、4～006rabのCLPHシステムと互換性があります。ソリッドコア粒子は、迅速かつ高分解能で分離できるため、臨床分析などのハイスループット用途での使用に最適です。図7:固体コア粒子を使用して達成可能な迅速かつ高効率の分離を実証するアプリケーションA:rotnavA®ECA®eroCartlUCrepuS81カラムでの抗ヒスタミン薬のアイソクラティック分離、B:非ステロイド性抗炎症薬のグラジエント分離Column:Avantor®ACE®UltraCore2.5SuperC18Dimensions:75x3.0mmMobilePhase:30mMKH2PO4pH2.7inH2O/MeOH(60:40v/v)FlowRate:0.85ml/minInjection:0.9µLTemperature:30°CDetection:UV,214nmColumn:Avantor®ACE®UltraCore2.5SuperC18Dimensions:50x3.0mmMobilePhase:A:0.1%formicacidinH2OB:0.1%formicacidinMeCNGradientFlowRate:0.85ml/minInjection:1.04µLTemperature:40°CDetection:UV,254nmTime(min)%MobilephaseB0.2202.71703.39703.5220CHROMATOGRAPHYSOLUTIONS
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1.Norepinephrine(m/z170→107),2.Epinephrine(m/z184→166),3.Normetanephrine(m/z184→166),4.Dopamine(m/z154→91),5.Metanephrine(m/z198→180),6.3-Methoxytyramine(m/z181→91)A1.1,25-diOHvitaminD3-PTAD-methylaminecomplex(m/z623.4→314.1),2.D3-1,25-diOHvitaminD3-PTAD-methylaminecomplex(I.S.)(m/z626.4→317.1),3.1,25-diOHvitaminD2-PTAD-methylaminecomplex(m/z635.4→314.1)BChromatographywhitepaper|avantorsciences.com11さらに、カラム充填に使用されるより大きな粒径とより高い多孔性フリットにより、ソリッドコアカラムは、同等の2μm未満のCLPHU粒子よりも詰まりが発生しにくくなります。これにより、それらの使用は、血漿や尿などの複雑なまたは「汚れた」サンプルマトリックスを含む用途に潜在的に有利になります。2つの一般的な臨床応用を図8に示します。ビタミンD2およびD3活性型と、カテコールアミンおよびその代謝物の分離です。これらはどちらも、eroCartlU固定相の分離能とタンデム質量分析の感度を組み合わせた高速分析です。eroCartlUカラムの高効率により、必要なクロマトグラフィー分離が高速分析時間で実施され、同時にシャープで低容量のクロマトグラフィーピークにより、SM/SM検出による高感度の分析が可能になります。Column:Avantor®ACE®UltraCore2.5SuperPhenylHexylDimensions:100x2.1mmMobilePhase:A:2mMammoniumformate+0.05%formicacidinH2OB:2mMammoniumformate+0.05%formicacidinMeOHGradientFlowRate:0.3ml/minInjection:10µLTemperature:30°CDetection:ShimadzuLCMS-8040(ESI,positiveionmode)Sample:Standard100ng/mlinurine(afterSPEpurification)Time(min)%MobilephaseB0.0001.00701.10701.1104.500Column:Avantor®ACE®UltraCore2.5SuperC18Dimensions:50x2.1mmMobilePhase:MeCN/H2O(50:50v/v)containing30µLmethylamineper500mlFlowRate:0.5ml/minInjection:20µLTemperature:40°CDetection:ABSciex5500triplequadMS-ESI,positiveionmode-IonSprayVoltage:5500VSourcetemperature:550°CSample:Highcalibrationstandard(500pg/ml)invitaminDstrippedserum.1,25-diOHvitaminD2and1,25-diOHvitaminD3metabolitesextractedfromserumusingSLE.LC-MS/MSsensitivitymaximisedthroughuseofPTAD(9-phenyl-1,2,4-triazole-3,5-dione)derivatisationandmethylaminecomplexationReproducedwithpermissionofShimadzu,France.ReproducedwithpermissionofBiotageGBLtd,UK.図8:C臨床応用、A:尿中に添加されたカテコールアミンおよびメタネフリンのCL-SM/SM測定 およびB:ビタミンDの活性型の血清レベルを分析するためのCL-SM/SMメソッドCHROMATOGRAPHYSOLUTIONS
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