Technical note J.T.Baker Viral Inactivation Solution 110による タンパク質治療薬の安定性 2(2)

avantorsciences.com|TechnicalNote2theproductstream[1].J.T.Baker®ViralInactivationSolution110isareadilybiodegradabledetergent,thatisusedforinactivationofvirusinamanufacturingprocessoftherapeuticpolypeptide.Oneofthecriticalfactorstoconsiderwhenselectingdetergentistheimpactofdetergentexposureontheproductquality.Thisstudywillshowthestabilityoftwotypesofprotein(IgG1andFab)whenitisincubatedwithViralInactivationSolution110atroomtemperature.Sizevariantsaremeasuredwithsizeexclusionchromatographyandyieldsfromaffinitycolumnpurificationarecomparedtoacontroldata.MATERIALSANDMETHODSToshowthestabilityofproteinwithdetergent,1%ofViralInactivationSolution110wasaddedtothepurifiedIgG1andFabin1XPBSandincubatedfor1and2hoursatroomtemperature.ThesamplesareanalyzedwithSECandHMWandLMWimpuritiesarecomparedtothecontrolsamplewithoutdetergent.Viralinactivationwithdetergentsiscommonlyperformedinclarifiedcellculturefluid(CCCF)beforethefirstcapturecolumnpurification.TostudythestabilityofproteininCCCFwithdetergent,1%ofViralInactivationSolution110wasaddedtotheCCCFofIgG1andFabandincubatedfor1houratroomtemperature.SamplesareanalyzedwithSECafterincubationandeachsampleisfurtherpurifiedusingaffinitycolumns.PurifiedsamplesareanalyzedwithSECandyieldsareanalyzedbasedonUV280absorbance.TABLE1:Conditionforincubationofpureproteinwith1%ViralInactivationSolution110TABLE2:ConditionforincubationofCCCFwith1%ViralInactivationSolution110VariablesIgG1FabConcentration1mg/ml,5mg/ml,10mg/ml1mg/mlViralInactivationSolution110concentration1%1%IncubationtemperatureRoomtemperatureRoomtemperatureIncubationtime1hour,2hours1hour,2hoursVariablesIgG1CCCFFabCCCFConcentration3.1mg/ml0.4mg/mlViralInactivationSolution110concentration1%1%IncubationtemperatureRoomtemperatureRoomtemperatureIncubationtime1hour1hourPurificationafterincubationProteinAcolumn(PROchievA™)ProteinLcolumn細胞培養から生産されるタンパク質治療薬の安全性を確保するために、ICHQ5ガイドラインでは、そのような医薬品の精製プロセスに、製造の流れからウイルスを不活化して除去する機能が求められています。（１）JTBaker®ViralInactivationSolution110は、治療用ポリペプチドの製造プロセスにおけるウイルスの不活化に使用される易生分解性の界面活性剤です。界面活性剤を選択する際に考慮すべき重要な要素の1つは、界面活性剤への暴露が製品の品質に与える影響です。この研究は、2種類のタンパク質の安定性を示します。（IgG1およびFab）室温でウイルス不活化溶液110とインキュベートした場合、サイズ排除クロマトグラフィーを使用してサイズ変異体を測定し、アフィニティーカラム精製からの収量を対照データと比較します。界面活性剤によるタンパク質の安定性を示すために、1％のViralInacivationSolution110およびFabを1xPBSに溶解し、精製IgG1に添加しました。室温で1時間および2時間インキュベートしました。サンプルはSECで分析され、HMWおよびLMWの不純物が界面活性剤を含まない対照サンプルと比較されます。界面活性剤によるウイルスの不活化は、通常最初のキャプチャカラム精製前に清澄細胞培養液（CCCF）中で行われます。界面活性剤を使用したCCCF中のタンパク質の安定性を研究するために、1％のウイルス不活化溶液110をIgG1およびFabのCCCFに添加し、室温で1時間インキュベートしました。サンプルはインキュベーション後にSECで分析され、各サンプルはアフィニティーカラムを使用してさらに精製されます精製されたサンプルはSECで分析され、収量はUV280吸光度に基づいて測定されます。材料および方法表1：1％のViralInactivSolution110と精製タンパク質のインキュベート条件表2：1％のViralInactivatSolution110とCCCFのインキュベート条件